Saturs
- Galvenā atšķirība
- Dienvidu blotēšana pret Rietumu blotēšana
- Salīdzināšanas tabula
- Kas ir Dienvidu blotings?
- Kas ir Rietumu blotēšana?
- Galvenās atšķirības
- Secinājums
Galvenā atšķirība
Galvenā atšķirība starp dienvidu un Rietumu blotēšanu ir tā, ka Southern blotting ir paņēmiens, ko izmanto, lai noteiktu specifisku DNS fragmentu noteiktā paraugā, turpretī Western blotting tiek izmantots, lai noskaidrotu konkrētu olbaltumvielu noteiktā paraugā.
Dienvidu blotēšana pret Rietumu blotēšana
Blotēšana ir tehnika, kuru zinātnieki izmanto, lai no maisījuma vai parauga atdalītu dažāda veida molekulas. Šajā metodē makromolekulas, piemēram, nukleīnskābes (DNS un RNS), un olbaltumvielas maisījumā pārvietojas pa gēla plāksni. Šeit minūtes daļiņas pārvietojas ātrāk nekā lielākās. Šīs molekulas tiek nospiestas pret imobilizētas membrānas virsmu, kas pārnes molekulas uz membrānu. Balstoties uz specifiska materiāla noteikšanu, ir dažādi blotēšanas veidi, t.i., dienvidu blotings, ziemeļu blotings un rietumu blotings. Dienvidu blotēšana ir blotēšanas veids, ko izmanto DNS noteikšanai, savukārt rietumu blotēšana tiek izmantota olbaltumvielu noskaidrošanai. Dienvidu blotēšanu izstrādāja Edvards M. Dienvids 1975. gadā. Tātad, tas ir pazīstams kā dienvidu blotings. No otras puses, rietumu blotēšanu 1979. gadā izstrādāja Džordža Starka grupa Stenfordas universitātē. Šis nosaukums tika izmantots, lai saskaņotu ar dienvidu blotēšanu. Dienvidu blotēšanu izmanto, lai noskaidrotu specifisku DNS secību, turpretī rietumu blotēšanu izmanto, lai noskaidrotu specifisku aminoskābju vai olbaltumvielu secību.
Salīdzināšanas tabula
| Dienvidu blotēšana | Rietumu blotēšana |
| Metode, ko izmanto, lai noskaidrotu konkrētu DNS secību noteiktā maisījumā, ir pazīstama kā dienvidu blotēšana. | Metode, kas tiek izmantota, lai noskaidrotu konkrētu olbaltumvielu aminoskābju secību noteiktā maisījumā, ir pazīstama kā dienvidu blotēšana. |
| Izstrādāja | |
| Dienvidu blotēšanu izstrādāja Edvards M. Dienvids 1975. gadā. | Rietumu blotēšanu izstrādāja Džordža Starka grupa Stenfordas universitātē 1979. gadā. |
| Noteikšanas veids | |
| Dienvidu blotēšanu izmanto, lai noskaidrotu specifisku DNS secību. | Western blotting tiek izmantots, lai noskaidrotu īpašu aminoskābju vai olbaltumvielu secību. |
| Princips | |
| Tas darbojas pēc hibridizācijas principa. | Tas darbojas pēc imūnsistēmas noteikšanas metodes vai antigēna un antivielas mijiedarbības. |
| Zonde | |
| Kā zonde tiek izmantota vienas stīgas DNS vai dažreiz RNS. | Kā zonde tiek izmantotas primārās un sekundārās antivielas. |
| Gēla elektroforēze | |
| Agarozes gēla elektroforēze tiek izmantota Dienvidu blotēšanā. | SDS PAGE / poliakrilamīda gēls, ko izmanto olbaltumvielu atdalīšanai rietumu blotēšanā |
| Blotēšanas procedūra | |
| Dienvidu blotēšana notiek pēc kapilāru pārvietošanas procedūras. | Western blotting seko elektriskās pārneses procedūrai. |
| Paraugs | |
| Dienvidu blotēšanas laikā paraugs ir denaturējams. | Rietumu blotēšanas laikā paraugam jābūt tā dzimtajā stāvoklī. |
| Bloķēšana | |
| Dienvidu blotēšanā nav iesaistīts neviens solis, piemēram, bloķēšana. | Rietumu blotēšanas laikā nespecifiskas antivielu vietas tiek bloķētas uz nitrocelulozes papīra ar piena pulvera vai liellopu seruma albumīna (BSA) palīdzību. |
| Marķēšanas metodes | |
| Izplatītākās marķēšanas metodes, ko izmanto dienvidu blotēšanā, ir hromogēno krāsvielu lietošana vai radioaktīvā marķēšana vai fluorescējošā marķēšana utt. | Marķēšanas metodes, kas tiek izmantotas rietumu blotēšanā, ir ar fluorescējoši marķētu antivielu vai radioaktīvo marķēšanu, hromogēno krāsu vai diaminobenzidīna veidošanās utt. |
| Noteikšanas metodes | |
| Gaismas noteikšana, autoradiogrāfs un krāsas izmaiņas tiek izmantotas kā atklāšanas metodes dienvidu blotēšanā. | Atklāšanas metodes rietumu blotēšanā ir krāsas izmaiņas un gaismas noteikšana utt. |
| Pieteikums | |
| Dienvidu blotēšanu izmanto DNS noteikšanā, paternitātes pārbaudē, DNS pirkstu noteikšanā, cietušo identificēšanā, noziedznieku identificēšanā, infekcijas izraisītāju atrašanā un mutāciju vai gēnu pārkārtošanās identificēšanā utt. | Western blotēšana tiek izmantota, lai atrastu olbaltumvielu daudzumu maisījumā, noteiktu HIV, vīrusa un baktēriju utt. Klātbūtni serumā, noskaidrotu nepilnīgus proteīnus, un to izmanto kā noteiktu mēru herpes, B hepatīta, Laima ārstēšanai slimība, kā arī Kreicfelda-Jēkaba slimība utt. |
Kas ir Dienvidu blotings?
Dienvidu blotēšana ir vecākā blotēšanas metode, ko piešķīris Edvīns Dienvids, tādējādi to nosaucot par dienvidu blotēšanu. To izmanto, lai noskaidrotu noteiktu DNS secību noteiktā paraugā vai maisījumā. Dienvidu blotēšanas laikā veiktie soļi ir elektroforēze, pārnešana un īpašu secību noteikšana. Pirmkārt, DNS tiek sadrumstalota ar īpaša restrikcijas fermenta palīdzību. Pēc tam vēlamos DNS fragmentus atdala ar gēla elektroforēzi. Šie fragmenti tiek denaturēti, izmantojot sārmainu šķīdumu, piemēram, NaOH utt., Lai atdalītu abas DNS virknes. Pēc tam šie vienpavediena DNS fragmenti, izmantojot blotēšanas procesu, tiek pārnesti uz membrānu. Pēc tam šo ar membrānu saistīto DNS apstrādā ar marķētu zondi. Šī zonde pievienosies savai papildinošajai daļai uz membrānas DNS, ko var vizualizēt ar autoradiogrammu utt.
Kas ir Rietumu blotēšana?
Western blotēšanas metodi izgudroja Džordža Stārka grupa Stenfordas universitātē, un to izmanto, lai identificētu īpašu aminoskābju secību proteīnā. Tas ir arī pazīstams kā olbaltumvielu blot vai imūnblotings. Rietumu blotēšanas laikā veic elektroforēzi, pārnešanu un noteiktu olbaltumvielu noteikšanu. Vispirms homogenizējiet maisījumu. Pēc tam ar elektroforēzes palīdzību atdaliet interesējošo molekulu. Pārnes šīs molekulas uz membrānas un, izmantojot īpašu zondi, identificē specifisko olbaltumvielu.
Galvenās atšķirības
- Metode, ko izmanto, lai noskaidrotu specifisku DNS secību noteiktā maisījumā, ir pazīstama kā dienvidu blotēšana, turpretī tehnika, kas tiek izmantota, lai noskaidrotu proteīna specifisko aminoskābju secību dotajā maisījumā, ir zināma kā dienvidu blotēšana.
- Dienvidu blotēšanu izstrādāja Edvards M. Dienvidu 1975. gadā, tā saukto dienvidu blotēšanu. No otras puses, rietumu blotēšanu izstrādāja Džordža Starka grupa Stenfordas universitātē 1979. gadā.
- Dienvidu blotēšanu izmanto, lai noskaidrotu specifisku DNS secību. Pretēji rietumu blotēšanai izmanto, lai noskaidrotu konkrētu aminoskābju vai olbaltumvielu secību.
- Dienvidu blotēšana darbojas pēc hibridizācijas principa; Western blotings darbojas pēc imūnsistēmas noteikšanas metodes vai antigēna un antivielas mijiedarbības.
- Dienvidu blotēšanā otrā pusē kā zondi tiek izmantota vienpavediena DNS vai dažreiz RNS, rietumu blotēšanā primārā un sekundārā antiviela tiek izmantota kā zonde.
- Agarozes gela elektroforēzi izmanto dienvidu blotēšanā, bet SDS PAGE / poliakrilamīda gēlu - proteīnu atdalīšanai rietumu blotēšanā.
- No otras puses, dienvidu blotēšana notiek pēc kapilāru pārvietošanas procedūras; Western Blotting seko elektriskās pārneses procedūrai.
- Dienvidu blotēšanas laikā paraugam jābūt denaturētam, turpretim rietumu blotēšanas laikā paraugam jābūt tā sākotnējā stāvoklī.
- Dienvidu blotēšanā flip pusē nav iesaistīta neviena tāda darbība kā bloķēšana, rietumu blotēšanas laikā nespecifiskas antivielu vietas tiek bloķētas uz nitrocelulozes papīra ar piena pulvera vai liellopu seruma albumīna (BSA) palīdzību.
- Izplatītākās marķēšanas metodes, ko izmanto dienvidu blotēšanā, ir hromogēno krāsvielu izmantošana vai radioaktīvie marķējumi, vai fluorescējošie marķējumi utt., Savukārt rietumu blotēšanā izmantotās marķēšanas metodes ir fluorescējoši marķētu antivielu vai radioaktīvo marķējumu, hromogēno krāsvielu vai diaminobenzidīna veidošanās izmantošana utt.
- Gaismas noteikšana, autoradiogrāfs un krāsas izmaiņas tiek izmantotas kā atklāšanas metodes dienvidu blotēšanā, turpretī rietumu blotēšanas noteikšanas metodes ir krāsas izmaiņas un gaismas noteikšana utt.
- Dienvidu blotēšanu izmanto DNS noteikšanā, paternitātes pārbaudē, DNS pirkstu noteikšanā, cietušo identificēšanā, noziedznieku identificēšanā, infekcijas izraisītāju atrašanā un mutāciju vai gēnu pārkārtošanās identificēšanā utt. Turpretī rietumu blotēšanu izmanto, lai atrastu olbaltumvielu skaitu maisījums, lai noteiktu HIV, vīrusa un baktēriju utt. klātbūtni serumā, lai noskaidrotu trūkumus olbaltumvielās un ko izmanto kā noteiktu līdzekli herpes, B hepatīta, Laima slimības un Kreicfelda-Jēkaba slimības u.c.
Secinājums
Iepriekš aprakstītajā diskusijā apkopots, ka dienvidu blotēšana ir vecākā blotēšanas metode, ko izmanto, lai noskaidrotu specifisku DNS segmentu paraugā, savukārt rietumu blotēšana tika atklāta pēdējā un tika izmantota, lai identificētu noteiktu aminoskābju secību vai noteiktu olbaltumvielu.
