Saturs

• Galvenā atšķirība
• I tipa ierobežojošie fermenti
• II tipa ierobežojošie fermenti
• Galvenās atšķirības

Galvenā atšķirība

Galvenā atšķirība starp I un II tipa restrikcijas fermentiem ir tā, ka I tipa restrikcijas enzīmi ir ļoti sarežģīti, salīdzinot ar II tipa restrikcijas fermentiem, un, izņemot to, I tipa restrikcijas enzīmi sastāv no trim neidentiskām apakšvienībām. No otras puses, II tipa restrikcijas enzīmus veido divas identiskas apakšvienības. Nukleāzes, kas iekšējā stāvoklī sagriež DNS, ir zināmas kā restrikcijas enzīmi. Punkts, kurā šie restrikcijas fermenti sagriež DNS vidusdaļu, bet ne beigās. Par šo restrikcijas enzīmu īpašību tie ir pazīstami kā endonukleāzes. Šos ierobežojumus sauc arī par molekulārajām šķērēm, molekulārajiem nažiem, molekulārajiem skalpeļiem vai restrikcijas fermentiem. Atpazīšanas vieta vai restrikcijas vieta ir reģions, kurā šie restrikcijas fermenti sagriež DNS. Šai restrikcijas vietnei ir vismaz 4-8 bāzes pāri. Ir trīs restrikcijas enzīmu grupas, kas ir šādas:

• I tipa restrikcijas endonukleāze
• II tipa restrikcijas endonukleāze
• III tipa restrikcijas endonukleāze

I tipa ierobežojošie fermenti

I tipa enzīmi ir vairākas apakšvienības un ir sarežģīta modifikācijas un restrikcijas enzīmu kombinācija. Šie fermenti sagriež DNS nejaušos punktos, bet tālu no to atpazīšanas sekvencēm. Šie fermenti bija zināmi ļoti reti, bet tagad, analizējot secētos genomus, mēs noskaidrojām, ka tie ir izplatīti. I tipa restrikcijas fermenti neveido gēla joslas modeļus vai diskrētus restrikcijas fragmentus, tāpēc tos praktiski neizmanto tikpat daudz kā II tipa fermentus, bet tiem ir īpaša bioķīmiskā nozīme.

II tipa ierobežojošie fermenti

II tipa restrikcijas enzīmi to atpazīšanas vietā vai tuvu to atpazīšanas vietām, noteiktā stāvoklī. Bez tam, tie rada diskrētus gēla saišu modeļus un diskrētus fragmentus. Tiem ir daudz praktiskas vērtības un tiek izmantoti ļoti bieži. Tie ir plaši pieejami tirdzniecībā. Lielākā daļa šo enzīmu saistās ar DNS kā homodimēri, un tie atpazīst arī simetriskas DNS sekvences. Daži no šiem restrikcijas fermentiem atpazīst arī asimetriskas DNS sekvences, jo tie saistās kā heterodimeri. Daži fermenti atpazīst arī nepārtrauktas sekvences. Šajās sekvencēs divas puses vietas atrodas blakus atpazīšanas secībai. Daži no šiem fermentiem atpazīst arī pārtrauktās sekvences, kurās puse vietas ir atdalītas viena no otras. Šķelšanās, kas notiek DNS, vienā pusē atstāj 5 fosfātus un otrā pusē - 3 hidroksilus. Tie ir mazāki ar apakšvienībām, kuru diapazons ir aptuveni 200-350. Visizplatītākie II tipa fermenti ir IIS tips. Viņi šķiras ārpus savas atpazīšanas vietas uz vienu pusi. Tie ir normāla izmēra un atpazīst sekvences, kas ir asimetriskas un nepārtrauktas. Viņiem ir divi domēni, viens DNS, otrs DNS sašķelšanai. Lielākoties tie saista DNS kā monomēri. Uz tām ļoti aktīvi darbojas DNS virzieni, kas satur dažādas atpazīšanas vietas, II tipa atpazīšanas enzīmus. Cits II tipa enzīmu veids ir IIG tips. Viņiem ir ierobežojošie un modificējošie enzīmi, turklāt tie ir lieli.

Galvenās atšķirības

1. I tipa restrikcijas enzīmi ir sarežģītāki, salīdzinot ar II tipa restrikcijas fermentiem.
2. I tipa atpazīšanas enzīmus veido trīs neidentificētas apakšvienības. II tipa atpazīšanas enzīmus veido divas identiskas apakšvienības.
3. I tipa restrikcijas enzīmu molekulmasa ir 400000 daltonu. II tipa restrikcijas enzīmu molekulmasa ir no 20 000 līdz 100 000 daltoniem.
4. I tipa restrikcijas enzīmu sagriešanas vieta atrodas 1000 nukleotīdu attālumā no atpazīšanas vietas. II tipa restrikcijas enzīmu sagriešanas vieta atrodas tajā pašā atpazīšanas vietā.
5. I veida restrikcijas fermentos griešanas secība nav specifiska. Griešanas secība ir raksturīga II tipa restrikcijas fermentiem.
6. I tipa fermenti ir atbildīgi par DNS aizsardzību ar metilēšanu, un II tipa fermentiem nav metilācijas aktivitātes.
7. I tipa enzīmu aktivizēšanai nepieciešami ATP, Mg2 + un adenosilmetionīns. II tipa enzīmu aktivizēšanai nepieciešams tikai Mg2 +.
8. I tipa fermentam ir gan endonukleāzes, gan metilāzes aktivitāte. II tipam ir tikai restrikcijas aktivitāte, tam nav endonukleāzes vai metilāzes aktivitātes.
9. I tipa fermenti tika identificēti pirms II tipa fermentiem.
10. I tips tika identificēts divos dažādos E.Coli celmos.
11. I tipa enzīmu piemēri ir Ecok un EcoB. II tipa enzīmu piemēri ir Hind II un EcoRI.